A partir de 1502, os europeus iniciaram as primeiras ocupações na região, com destaque para a atuação dos padres jesuítas. Estes se preocupavam em estabelecer missões e catequizar as populações indígenas, além de ajudar na organização e ocupação do território. A principal preocupação dos europeus era ocupar os espaços do estuário, uma área estratégica devido à sua proximidade
com o mar e à facilidade de acesso às riquezas naturais.
Além disso, houve uma busca constante por minério de ouro, o que levou à realização de diversas expedições. Em 1526, Francisco Chaves, em busca da lendária trilha do Peabiru, percorreu vastas regiões em busca de riquezas. A mineração, que começou a se expandir ao longo do Rio Ribeira de Iguape, logo avançou para os rios que desaguam na Baía de Paranaguá, aumentando a pressão sobre o território.
A chegada de Martim Afonso de Souza, em 1531, trouxe consigo um novo conflito. Ao tentar estabelecer um núcleo de colonização, ele se desentendeu com os europeus já p